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一文看懂酶聯(lián)免疫分析試劑盒的基本原理及操作流程

更新時間:2022-06-16點擊次數(shù):1557
  酶聯(lián)免疫分析試劑盒基本原理是利用抗原抗體反應(yīng)的特異性,通過將待測物與酶連接,然后酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),其所生成的顏色深淺與待測抗原(或抗體)的含量成正比。這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(酶標(biāo)儀)加以測定。由于ELISA是基于抗原抗體反應(yīng)的特異性,這意味著該種方法的測定對象既可為抗原也可為抗體:當(dāng)被分析樣本為抗原時,檢測試劑可針對該種抗原產(chǎn)生特異性的抗體;當(dāng)被分析樣本為抗體時,則其目標(biāo)抗原可用作結(jié)合的試劑。
  酶聯(lián)免疫分析試劑盒具體的操作流程:
  1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
  3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
  4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
  6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
 

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