生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒是一種用于體外定量檢測(cè)血液、組織、細(xì)胞上清等樣本中特定生長(zhǎng)因子濃度的科研試劑。它利用抗原-抗體的特異性結(jié)合,將不可見(jiàn)或難以定量的生長(zhǎng)因子信號(hào),轉(zhuǎn)化為可精確讀取的光學(xué)信號(hào)(顏色深淺),在生命科學(xué)研究中應(yīng)用廣泛。
??檢測(cè)原理
以常見(jiàn)的雙抗體夾心ELISA為例,其流程如下:
包被:將針對(duì)目標(biāo)生長(zhǎng)因子的特異性抗體固定在酶標(biāo)板孔上。
封閉:加入封閉液,占據(jù)板孔上非特異性結(jié)合位點(diǎn),降低背景干擾。
加樣:加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本,樣本中的生長(zhǎng)因子與固相抗體結(jié)合。
孵育與洗滌:孵育使反應(yīng)充分,然后洗去未結(jié)合的雜質(zhì)。
加酶標(biāo)抗體:加入與目標(biāo)生長(zhǎng)因子另一表位結(jié)合的、帶有酶標(biāo)記的二抗。
再次孵育與洗滌:形成“抗體-生長(zhǎng)因子-酶標(biāo)抗體”夾心復(fù)合物,并洗去多余抗體。
顯色:加入底物溶液,酶催化底物產(chǎn)生顏色,顏色深淺與生長(zhǎng)因子濃度正相關(guān)。
終止與讀數(shù):加入終止液終止反應(yīng),用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣本濃度。
??主要應(yīng)用
生長(zhǎng)因子在多種生理和病理過(guò)程中起關(guān)鍵作用,其ELISA試劑盒主要用于:
基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究:研究生長(zhǎng)因子在發(fā)育、組織修復(fù)、免疫調(diào)節(jié)、腫瘤生長(zhǎng)等過(guò)程中的作用機(jī)制。
疾病標(biāo)志物探索:探索生長(zhǎng)因子作為腫瘤、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、炎癥和代謝性疾病等的潛在標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)。
藥物研發(fā)與藥效評(píng)價(jià):在體外或動(dòng)物模型中,評(píng)價(jià)藥物對(duì)生長(zhǎng)因子信號(hào)通路的影響。
??使用要點(diǎn)
樣本處理:根據(jù)說(shuō)明書(shū)要求處理樣本(如離心、稀釋?zhuān)?,避免溶血、脂血或反?fù)凍融。
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):確保標(biāo)準(zhǔn)品的復(fù)孔穩(wěn)定性,以保證定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。
孵育條件:嚴(yán)格遵守說(shuō)明書(shū)規(guī)定的時(shí)間和溫度,避免孵育不足或過(guò)長(zhǎng)。
洗滌充分:每次洗滌后盡量去除殘留液體,以減少背景信號(hào)和非特異性結(jié)合。
濃度范圍:若樣本濃度過(guò)高,需按說(shuō)明書(shū)稀釋后重測(cè),確保結(jié)果落在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍內(nèi)。
結(jié)果判讀:注意區(qū)分科研用途與臨床診斷,ELISA試劑盒通常僅供體外科研使用。
