細胞專用培養(yǎng)基是為特定細胞類型量身定制的培養(yǎng)環(huán)境,能夠提供該細胞生長所需的特定營養(yǎng)成分、生長因子和適宜的pH與滲透壓條件,從而確保細胞保持最佳增殖狀態(tài)和功能特性。
如何預防細胞污染:
構建無菌環(huán)境:
細胞房與超凈臺管理
實驗前開啟紫外燈照射30–60分鐘,殺滅空氣和臺面微生物。
操作前用75%酒精擦拭超凈臺臺面、側壁及儀器表面,確保無菌操作區(qū)潔凈。
保持氣流穩(wěn)定,避免頻繁進出或手臂跨越無菌區(qū)域,防止擾動氣流引入污染。
培養(yǎng)箱與輔助設備維護
每周清潔培養(yǎng)箱內壁,使用75%酒精或過氧化氫擦拭,防止霉菌滋生。
增濕盤添加無菌去離子水,并定期更換,可加入真菌抑制劑預防污染。
顯微鏡、離心機等共用設備使用前后均需酒精消毒,避免交叉污染。
空間消毒策略
定期采用甲醛熏蒸或過氧化氫干霧滅菌對整個細胞房進行深度消毒,尤其適用于頑固污染處理。
空氣沉降菌檢測每周至少一次,確??諝赓|量符合細胞培養(yǎng)標準。
規(guī)范實驗操作:
人員防護與無菌意識
進入細胞間需穿戴無菌實驗服、口罩、手套和鞋套,必要時佩戴帽子。
操作前用75%酒精消毒雙手,避免觸碰非無菌物品(如手機、門把手)。
手套破損立即更換,不同細胞操作間建議更換新手套或酒精搓手。
無菌操作要點
所有開蓋操作在酒精燈火焰附近進行,瓶口、管口需短暫過火滅菌。
移液槍頭、吸管等耗材專管專用,嚴禁混用,防止交叉污染。
動作輕柔,避免劇烈晃動引起空氣流動,減少污染機會。
細胞處理規(guī)范
換液時傾斜培養(yǎng)瓶,沿壁緩慢加入新鮮培養(yǎng)基,減少對細胞的物理沖擊。
傳代消化過程中,胰酶使用后不再重復利用,剩余液體直接丟棄。
離心后開蓋前用酒精擦拭離心管外壁,防止殘留液滴造成污染。