生物堿含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法100 管/96 樣

注   意 ：正式測(cè)定前取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：

生物堿存在于自然界（主要為植物，但有的也存在于動(dòng)物）中的一類含氮的堿性有機(jī)化合物， 大多數(shù)有復(fù)雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，氮素多包含在環(huán)內(nèi)，有顯著的生物活性，是中草藥中重要的有效成分之一。

測(cè)定原理：

生物堿與溴甲酚綠指示劑反應(yīng)，生成綠色化合物，在 416nm 處有最大吸收峰。

需自備的儀器和用品：

酶標(biāo)儀、水浴鍋、超聲波清洗器、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、80%乙醇、氯仿和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 12mL× 1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體 30mL × 1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 15mL × 1 瓶，4℃避光保存；

生物堿的提取：

樣本烘干粉碎，過(guò) 80 目篩。稱取約 0.1g 樣本，加入 0.1mL 試劑一，再加入 0.9mL80%乙醇， 充分混勻后轉(zhuǎn)移到EP 管中，超聲波提取 60min， 8000 g，25℃離心 10 min，取上清液待測(cè)。另取空 EP 管，加入 0.1mL 試劑一和 0.9mL80%乙醇，混勻后作為空白液。

測(cè)定步驟：

1、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 416nm 處。

2、操作表：在EP 管中加入如下試劑

混勻，室溫靜置 5min

劇烈振蕩混勻，室溫靜置 40min，吸取下層氯仿層 200µL 于 96 孔板，416nm 處讀取吸光值

A，ΔA=A 測(cè)定-A 空白，空白管只要做一管。

生物堿含量計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 1.915x - 0.0005，R2 = 0.9942；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），

y 為 ΔA。

生物堿含量(mg/g 干重)=(ΔA+0.0005)÷1.915×V 樣總÷W= 0.522×(ΔA+0.0005) ÷W

V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本鮮重，g。