土壤芳基硫酸酯酶（Solid-aryl sulfatase，S-ASF）試劑盒說明書

                                          微量法100管/48樣

注   意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

土壤芳基硫酸酯酶來自于土壤微生物，能酶促土壤有機硫化物轉(zhuǎn)化為植物可吸收的無機態(tài)硫，在硫素的生物化學(xué)循環(huán)和植物的硫營養(yǎng)代謝中具有重要的作用，是反映土壤質(zhì)量的一個重要生物學(xué)指標。

測定原理：

S-ASF能夠催化對-硝基苯硫酸鉀生成對-硝基苯酚，后者在410nm有特征光吸收。

自備用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存（自備）；

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×2支，-20℃保存；臨用前加入1.25mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存;

試劑四：液體5mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：液體20mL×1瓶，4℃保存；

樣品處理：

新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，過30~50目篩。

測定步驟：

振蕩混勻，使土樣全部濕潤，室溫放置15min

混勻， 37℃水浴1h后

充分混勻，室溫靜置2min后，10000g 25℃離心10min，取200μL上清液于410nm處測定吸光值A，計算

ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。

S-ASF活力計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0066x -0.013；x為標準品濃度（μmol/L），y為吸光值。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-ASF活力（μmol/d /g 土樣）＝ (ΔA+0.013) ÷0.0066×V反總÷W÷T =19.09×(ΔA+0.013)

T：反應(yīng)時間，1h=1/24d；V反總：反應(yīng)體系總體積：2.625×10^-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.05g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0033x -0.013；x為標準品濃度（μmol/L），y為吸光值。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-ASF活力（μmol/d /g 土樣）＝ (ΔA+0.013) ÷0.0033×V反總÷W÷T =38.19×(ΔA+0.013)

T：反應(yīng)時間，1h=1/24d； V反總：反應(yīng)體系總體積：2.625×10^-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.05g。