土壤硝態(tài)氮試劑盒說明書

                                       微量法100T/96S

注   意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

硝態(tài)氮是指硝酸鹽中所含有的氮元素，土壤中的有機物分解生成銨鹽，被氧化后變?yōu)橄鯌B(tài)氮。土壤中硝態(tài)氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接關(guān)系到作物的產(chǎn)量與品質(zhì)。

測定原理：

在濃酸條件下，NO^3-與水楊酸反應，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與含量成正比，可比色測定計算得硝態(tài)氮含量。

自備實驗用品及儀器：

蒸餾水、天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、振蕩儀。

試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×2支，4℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每支加1mL濃硫酸充分溶解。

試劑二：液體50mL×1瓶，4℃保存。

樣本處理：

按照土壤質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g新鮮土樣，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，置于振蕩儀中振蕩提取1h，25℃，10000g離心10min，取上清待測。

測定操作表：

1、   分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至410nm，蒸餾水調(diào)零。

2、   操作表（于EP管中加入下列試劑）

計算公式：

a.        用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.0156x+0.0073，R²=0.9997

NO₃^—— N含量（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V樣總）

                =64.1×（△A-0.0073）÷W

V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

b.       用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.0078x+0.0073，R²=0.9997

NO₃^—— N（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V樣總）

                =128.2×（△A-0.0073）÷W

V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

注意事項：

1.        硝酸根不為土壤膠體吸附，且易溶于水，很容易在土壤內(nèi)部移動，所以測定此指標時應注意采樣深度一致。

2.        土壤經(jīng)風干或者烘干很容易引起NO₃^—— N的變化，所以最好采用新鮮土壤進行測定，以準確反映該指標含量。

3.        試劑一配制好后盡快使用，4℃可保存一周。

4.        試劑一和試劑二均具有強腐蝕性，操作時需做好防護措施。

5.        Z低檢出限為100μg/kg。