轉基因大豆品系MON87751核酸檢測試劑盒

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：轉基因大豆品系MON87751核酸檢測試劑盒

Name：Transgenic soybean MON87751 line fluorescent PCR kit

【包裝規(guī)格】48T/盒

【產(chǎn)品說明】

轉基因檢測系列產(chǎn)品可針對食品、飼料等樣品中轉基因成分的特異核酸片段進行擴增，通過實時擴增曲線判定結果。本產(chǎn)品用于轉基因大豆品系 MON87751 成分的檢測，檢出限為 0.01%。

【產(chǎn)品組成】

【適應儀器】

ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等實時熒光 PCR 儀。

【自備耗材和儀器】

①冰盒；②移液器（0.5-10 μL，10-100 μL，100-1000 μL）及配套滅菌吸頭；③滅菌 0.2 mL PCR 管或八聯(lián)管；

④離心機；⑤渦旋混勻器；⑥金屬??；⑦均質機、攪拌機或研缽等研磨器具；⑧電子天平。

【 注意事項】

1.      本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。

1） 第一區(qū)：試劑準備區(qū)。

2） 第二區(qū)：樣本制備區(qū)。

3） 第三區(qū)：擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。

★ 分區(qū)之間最好進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2.      實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨立使用工具，需更換手套和實驗服。

3.      嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。

4.      反應液中的成分對光敏感，應避光保存。試劑使用前要wan全解凍，但應避免反復凍融，推薦使用前離心 30

秒，并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。

5.      反應結束后，擴增管請置于密封袋內丟棄，當日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

6.      不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內使用。

【樣品處理】

參照《GB/T 19495.3-2004 轉基因產(chǎn)品檢測 核酸提取純化方法》或其他標準處理樣品，除了處于食物和（或） 飼料鏈起始端的農(nóng)產(chǎn)品和粗加工材料（如粉碎的產(chǎn)品），大多數(shù)工業(yè)加工的食品經(jīng)過了物理、化學及酶的處理。這些處理會降低 DNA 的含量及純度。因此，每一方法的適用性及重復性會隨特異樣品而異，一種特定的 DNA/提取方法的性質特征依賴于被研究的食品種類。實驗室樣品的代表性應符合《GB/T 19495.7-2004 轉基因產(chǎn)品檢測抽樣和制樣方法》。制備的樣本保存待用。

★ 若使用非一次性研磨器研磨樣品，一定要che底清洗研磨器并充分干燥后再進行下一份樣品的研磨，防止交叉污染。

【實驗操作】

1.    試劑配制（試劑準備區(qū)，放置于冰盒中進行）：

若有 N 個待檢樣品，則參照下表，按照 N+2 個數(shù)量計算反應液用量（N 個待檢樣品+1 個空白對照+1 個陽性照），渦旋混勻，離心 30 秒，分裝于 0.2 mL PCR 管中。

2.      模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套植物基因組 DNA/提取試劑盒，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

3.      添加模板（樣本制備區(qū)，放置于冰盒上進行）

在步驟 1 中已含有反應液的 PCR 管中加入 5 μL 模板，順序為 NG-P、待測樣品模板、PG-MON87751-P。渦旋混勻，離心 30 秒，立即進行 PCR 擴增反應。

4.      擴增反應（擴增及產(chǎn)物分析區(qū)）

使用熒光定量 PCR 儀，熒光基團選擇 FAM，淬滅基團選擇 NONE。按下列條件設置擴增反應：

5.      基線和閾值設定

基線調整取 3-15 個循環(huán)的熒光信號，閾值線應超過空白對照擴增曲線的最高點。

【結果判定】

測試樣品檢測 Ct 值≥40，曲線為直線或輕微斜線，無“S"型擴增曲線，可判定樣品不含有 MON87751 品系或含量低于檢出限；

測試樣品檢測 Ct 值≤36，曲線呈“S"型擴增曲線，可判定樣品含有 MON87751 品系；

測試樣品檢測 Ct 值在 36～40 之間，應調整模板濃度，重做實時熒光 PCR。再次擴增后的樣品檢測 Ct 值＜40， 則可判定樣品含有 MON87751 品系；再次擴增后的樣品檢測 Ct 值≥40，則可判定該樣品不含有 MON87751 品系或含量低于檢出限。

★NG 反應為平滑直線，PG 反應為“S"型擴增曲線，此次檢測結果有效，否則無效。如重復檢測結果仍為無效，請與技術支持人員聯(lián)系。