HCEC人角膜上皮細胞

簡稱：HCEC

中文名：人角膜上皮細胞

別名：人角膜上皮細胞，HCEC細胞

種屬：人

來源：角膜；上皮細胞

培養(yǎng)條件：DMEM

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

狀態(tài)：貼壁

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

細胞培養(yǎng)操作步驟：

1. 吸走多余培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞；

2. 吸干凈PBS后

加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰-酶浸沒細胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；

（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài)，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞*漂浮?；靹蚣毎麜r盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）

3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；

4. 將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；

傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實驗室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。

凍存方法：

1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存。

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